總巰基測定試劑盒說明書
微量法 100T/48S
正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
生物體內(nèi)巰基主要包括谷胱甘肽巰基和蛋白質(zhì)巰基。前者不僅能夠修復(fù)氧化損傷的蛋白質(zhì),而且參與 活性氧清除,后者對(duì)于維持蛋白質(zhì)構(gòu)象具有重要作用。通過測定總巰基含量和 GSH 含量,能夠間接測定 蛋白質(zhì)巰基含量。
測定原理:
巰基基團(tuán)與 5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸(DTNB)反應(yīng),生成黃色化合物,在 412nm 處有最大吸收峰。
自備儀器和用品:
天平、研缽、恒溫水浴鍋、酶標(biāo)儀、96 孔板、乙醇和蒸餾水。
樣品的制備:
1. 按照組織質(zhì)量(g):水體積(ml)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1ml 蒸餾水)進(jìn)行冰 浴勻漿,然后 8000g,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
2. 血清,培養(yǎng)液:稀釋 5 倍后測定,可取 0.1ml 樣本,加入 0.4ml 蒸餾水,混勻,置冰上待測。
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