簡(jiǎn)要介紹
CFDA（5(6)-Carboxyfluorescein diacetate），是一種細(xì)胞膜滲透性的酯酶底物，用作一種活細(xì)胞探針，能用來測(cè)定激活其熒光所需的酶活性，也能用來檢測(cè)維持熒光產(chǎn)物保留在胞內(nèi)的細(xì)胞膜完整性。
一旦被胞內(nèi)酯酶水解后，代謝產(chǎn)生羧基熒光素（Carboxyfluorescein, CF）。與熒光素相比，羧基熒光素含有負(fù)電荷較多，從而能保留在胞內(nèi)。
物理性質(zhì)
【英文名稱】：5(6)-Carboxyfluorescein diacetate
【中文名稱】：5(6)-羧基熒光素二乙酸酯
【CAS NO】：124387-19-5
【分子式】：C25H16O9
【分子量】：460.39 g/mol
【狀態(tài)】：淺黃色粉末
【Ex/Em】：492/517nm
【溶解性】：溶于DMSO
【純度】：≥95%
【儲(chǔ)存條件】：-20℃避光干燥
使用方法和注意事項(xiàng)
5(6)-CFDA 工作液的制備
1. 儲(chǔ)備液的制備
將 1 mg 5(6)-CFDA 溶解在 0.21 mL DMSO 中，得到 10 mM 的 5(6)-CFDA。
注意：建議儲(chǔ)備液在 -20℃、-80℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
2. 5(6)-CFDA 工作液
用無血清細(xì)胞培養(yǎng)基或 PBS 稀釋儲(chǔ)備液，得到 1-10 μM 的 5(6)-CFDA 工作液。
注意：請(qǐng)調(diào)整濃度 5(6)-CFDA 工作液根據(jù)實(shí)際情況而定。
細(xì)胞染色
1.細(xì)胞制備：
懸浮細(xì)胞：4°C 1000 g 離心 3-5 分鐘，然后棄去上清液。PBS 洗滌 2 次，每次 5 分鐘。
貼壁細(xì)胞：棄去細(xì)胞培養(yǎng)基，加入胰蛋白酶解離細(xì)胞，制成單細(xì)胞懸液。在 4°C 下以 1000 g 離心 3-5 分鐘，然后棄去上清液。PBS 洗滌 2 次，每次 5 分鐘。
2. 加入1 mL 5(6)-CFDA 工作液，室溫孵育 30 分鐘。
3. 400g 離心 4℃ 3-4 分鐘，棄上清。
4. PBS 洗滌 2 次，每次 5 分鐘。
5. 用無血清細(xì)胞培養(yǎng)基或 PBS 重懸細(xì)胞，然后熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
注意事項(xiàng)
1、建議儲(chǔ)備液避光保存在 -20℃ 或 -80℃，避免重復(fù)凍融循環(huán)。
2、請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整 5(6)-CFDA 工作液的濃度。
3、本品只供研發(fā)使用，不得用于臨床、家庭或其他用途。
4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿白大褂，戴一次性手套操作。
關(guān)鍵字： 124387-19-5;5(6)-Carboxyfluoresc;
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