| 體外 | 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯抑制增殖并誘導(dǎo)人前單核細胞白血病細胞的 GSH 依賴性細胞死亡。14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯 （AND2） 是穿心蓮內(nèi)酯的類似物，對人原單核細胞白血病 （THP-1） 細胞的細胞毒性比貼壁癌細胞系更有效。
方法和結(jié)果：
在本研究中，從植物穿心蓮中分離出 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯并對其進行表征。通過 MTT 法評價 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯對貼壁 （PC-3 和 MDAMB） 和非貼壁 （THP-1 和 Jurkat） 癌細胞系的抗增殖作用。通過對 GSH 預(yù)處理的細胞進行細胞活力測定，研究了細胞內(nèi)還原型谷胱甘肽 （GSH） 對 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯誘導(dǎo)的細胞毒性的影響。通過分析內(nèi)源性還原的 GSH 含量，確定 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯對 THP-1 細胞氧化還原狀態(tài)的影響。使用抗 caspase-3 蛋白抗體通過 DNA 階梯測定和 Western blot 分析證實細胞凋亡誘導(dǎo)。14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯對 THP-1 和 Jurkat 癌細胞系均具有抗增殖作用，IC50 值低。GSH 預(yù)處理逆轉(zhuǎn)了 AND2 的細胞毒性。AND2 處理使 THP-1 癌細胞系中的 GSH 含量降低了 19.76% （p < 0.001），并減少了 THP-1 細胞之間的細胞聚集。在 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯處理的時間過程中，THP-1 細胞中 procaspase-3 的表達發(fā)生了變化。Procaspase-3 表達在 32 小時時在處理的細胞中達到最大值，并在 48 小時時顯著降低，但未觀察到 procaspase-3 切割。獲得的結(jié)果表明，14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯對白血病細胞更有效。14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯誘導(dǎo) THP-1 細胞氧化還原介導(dǎo)的細胞死亡。
結(jié)論：
由于 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯在治療過程中暫時增加了 procaspase-3 的表達，本研究鼓勵 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯與直接激活 procaspase-3 為 caspase-3 的小分子聯(lián)合使用針對前單核細胞白血病細胞的臨床前測試。 穿心蓮內(nèi)酯和 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯對培養(yǎng)的原代星形膠質(zhì)細胞和 PC12 細胞的影響。測試穿心蓮內(nèi)酯 （AP1） 和 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯 （AP2） 對富含星形膠質(zhì)細胞的環(huán)境中嗜鉻細胞瘤細胞系 12 （PC12） 細胞的影響。
方法和結(jié)果：
測試了 AP1 和 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯減少刺激星形膠質(zhì)細胞分泌促炎細胞因子白細胞介素 （IL）-1 、 IL-6 和腫瘤壞死因子 （TNF） -α 的能力。此外，使用氧化敏感熒光染料測試了 AP1 和 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯降低星形膠質(zhì)細胞氧化應(yīng)激的能力。使用斑點印跡法檢測刺激的星形膠質(zhì)細胞中硫酸軟骨素蛋白多糖 （CSPG） 的減少。在 PC12 細胞中測試了 H（2）O（2） 誘導(dǎo)的死亡的減少。星形膠質(zhì)細胞條件培養(yǎng)基 （ACM） 和 TNF α刺激的星形膠質(zhì)細胞條件培養(yǎng)基 （SACM） 用于評估 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯對 H（2）O（2） 處理的 PC12 細胞的影響。AP1 和 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯減少了 TNF α刺激的星形膠質(zhì)細胞中的促炎細胞因子、活性氧 （ROS） 和 CSPG。AP1 保護在 ACM 中培養(yǎng)的 H（2）O（2） 處理的 PC12 細胞。PC12 細胞在 H（2）O（2） 中共孵育，并從 AP1 處理的星形膠質(zhì)細胞中收集的 ACM 不能防止細胞死亡。
結(jié)論：
AP1 和 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯有效改善星形膠質(zhì)細胞促炎反應(yīng)，預(yù)防 PC12 細胞死亡，療效不同。這些化合物可能是治療脊髓損傷和神經(jīng)退行性變的候選藥物。 |
| 體內(nèi) | 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯在麻醉大鼠和離體右心房中的心血管活性。方法和結(jié)果：
穿心蓮 （Burm.f.） 14-脫氧-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯 （DDA） 的心血管活性在麻醉的 Sprague-Dawley （SD） 大鼠和分離的大鼠右心房中闡明了 Nees （Acanthaceae）。在麻醉大鼠中，DDA 以劑量依賴性方式使平均動脈血壓 （MAP） 和心率顯著下降，最大下降幅度分別為 37.6 +/- 2.6% 和 18.1 +/- 4.8%。MAP 的 ED50 值為 3.43 mmol kg-1。使用該劑量進行藥理學拮抗劑研究。DDA 的降壓作用不是通過對 α-腎上腺素能受體、毒蕈堿膽堿能和組胺能受體的影響來介導(dǎo)的，因為它不受酚妥拉明、阿托品以及嘧啶和西咪替丁的影響。然而，它似乎通過腎上腺素能受體、自主神經(jīng)節(jié)受體和血管緊張素轉(zhuǎn)換酶起作用，因為在普萘洛爾、己美銨和卡托普利存在下，DDA 的降壓作用被抵消或減弱。在離體的右心房中，DDA 以非競爭性和劑量依賴性方式引起負嗜時作用并拮抗異丙腎上腺素誘導(dǎo)的正嗜時作用。
結(jié)論：
這些結(jié)果進一步支持 DDA 在體內(nèi)的心動過緩誘導(dǎo)和 β-腎上腺素能受體拮抗特性。 |