人間充質干細胞成軟骨分化試劑盒
一、產品基本信息
產品名稱 | Applied Cell? 人間充質干細胞成軟骨分化試劑盒 |
貨 號 | AC-1001028 |
規(guī) 格 | 1kit |
保存條件 | 基礎培養(yǎng)基 2-8℃，添加劑-20--80℃保存； 混合后 2-8℃保存，3 周內使用完畢 |
使用范圍 | 人間充質干細胞誘導分化成軟骨 |
保質期 | 1 年 |
二、產品簡介
人間充質干細胞成軟骨分化試劑盒是埃澤思生物（Applied Cell?）自主研發(fā)的一款用于人類間充質干細胞分化成軟骨產品，可用于骨髓、臍帶、脂肪等組織來源的間充質干細胞的誘導成軟骨分化。
三、產品特性
l 誘導分化程序簡單便捷。
l 誘導成軟骨細胞效率高。
四、產品內容
試劑 | 規(guī)格 | 數量 | 運輸 |
人間充質干細胞成軟骨分化基礎培養(yǎng)基 | 90mL | 1 瓶 | 冰袋 |
人間充質干細胞成軟骨分化添加劑 | 10mL | 1 瓶 | 干冰 |
五、操作方法
1. 相關材料
? Xeno-Free 人間充質干細胞培養(yǎng)基（Applied Cell?:AC-1001003）
? 人間充質干細胞成軟骨分化試劑盒（Applied Cell?:AC-1001028）
? 成軟骨檢測染液（Applied Cell?:AC-1001023）
? 細胞消化液（Applied Cell?:AC-1001024）
? 磷酸鹽緩沖液(1×) （Applied Cell?: Cat.AC-1001037）
2. 實驗準備
人間充質干細胞成軟骨分化培養(yǎng)基的配制：
2.1. 在 2-8℃解凍人間充質干細胞成軟骨分化添加劑，輕晃搖勻；
2.2. 將添加劑加入到人間充質干細胞成軟骨分化基礎培養(yǎng)基中（添加劑 10mL 與 90mL 基礎培養(yǎng)基徹底混合）混勻，即為人類間充質干細胞成軟骨分化培養(yǎng)基。人間充質干細胞成軟骨分化培養(yǎng)基可 在 2-8℃穩(wěn)定儲存 2-3 周。
注意：人間充質干細胞成軟骨分化添加劑只能在 2-8℃解凍，待添加劑加入到培養(yǎng)基以后，請用培養(yǎng)基潤洗添加劑試管 1-2 次，因添加劑量較少可防止添加劑粘附在試管壁上造成損失。
3. 實驗操作
3.1. 誘導成軟骨球
3.1.1. 誘導成軟骨分化實驗之前，用細胞消化液消化后計數；
3.1.2. 分配 0.5 mL 細胞懸液（2-3×105 個細胞）到 15mL 或 50mL 離心管中，300×g，離心 5min；
3.1.3. 吸掉上清，用 2-5mL 人間充質干細胞成軟骨分化培養(yǎng)基重懸沉淀。
3.1.4. 離心后擰松離心管蓋便于氣體交換，置于 37℃，5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第 2 天，細胞團應在離心管底部呈球形的團狀；
注意：離心后不需要吸掉上清液，且不要隨意晃動離心管。
3.1.5. 自接種時間開始計算，每天更換人間充質干細胞成軟骨分化培養(yǎng)基；
注意：每次換液時，輕輕的搖動離心管或輕彈離心管底部確保細胞球沒有粘附到管壁上。第 4-5 天即會看到非常明顯軟骨球。
3.1.6. 15-21 天，軟骨球停止生長，收獲軟骨球：吸掉人間充質干細胞成軟骨分化培養(yǎng)基，用
PBS 洗 1 次。
3.2. 成軟骨檢測染液染色
3.2.1. 清洗：軟骨球用 PBS 清洗 2 次；
3.2.2. 固定：加 2mL 細胞固定液，固定 30min，水洗 2 次；
3.2.3. 染色：成軟骨檢測染液（AC-1001023）染色 5min；
3.2.4. 洗滌：dH2O 洗去多余的染料，軟骨球呈深藍色。切片染色：
3.2.5. 復水：將誘導分化的軟骨球切片浸泡在 100% (vol/vol) 乙醇中 2×5 min， 95% (vol/vol) 乙醇中 1×2min，70% (vol/vol)乙醇中 1×2 min；
3.2.6. 用流動的水沖洗 30s；
3.2.7. 成軟骨染料染色 5min；
3.1.1. 用 dH2O 洗去多余的染料；
3.1.2. 脫水：浸泡在 95% (vol/vol) 乙醇中 2×5min，在 100% (vol/vol) 乙醇中 2×5min;
3.1.3. 用二甲苯清洗 3×2 min；
3.1.4. 用中性樹膠封片，用顯微鏡觀察并拍照。
4. 誘導成軟骨效果圖
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埃澤思生物總部位于上海，公司取名Applied Cell(應用細胞)，是一家致力于為細胞治aize 療、再生埃澤思生物總部位于上海，公司取名AppliedCell(應用細胞)，是一家致力于為細胞治療、再生醫(yī)學提供核心原料，以及研發(fā)服務（CRO ）和生物藥委托開發(fā)生產服務（CDMO）的生物科技公司。目前公司產品已經涵蓋干細胞、免疫細胞治療全流程試劑原料。其中核心產品已經完成美國FDADMF備案以及國家藥品評審中心（CDE）藥物原輔料備案，是國內資質最為齊全的細胞治療原料供應商之一。目前，公司已與國內6家細胞治療企業(yè)進行細胞治療一類新藥聯(lián)合申報，一項日本一類新藥聯(lián)合申報。