蛋白需求不同，那么表達(dá)宿主體系也不盡相同。原核表達(dá)體系常用的宿主為大腸桿菌和枯草桿菌，前者表達(dá)量高，后期產(chǎn)品需要去除內(nèi)毒素；后者蛋白產(chǎn)量相對(duì)較低，但不產(chǎn)生內(nèi)毒素。重組蛋白大腸桿菌表達(dá)常采用BL21（DE3）和K-12衍生菌株作為表達(dá)宿主與枯草桿菌作為表達(dá)菌株的主要區(qū)別如下所示：
項(xiàng)目 | 大腸桿菌表達(dá)宿主 | 枯草桿菌表達(dá)宿主 |
優(yōu)點(diǎn) | 應(yīng)用廣泛，操作簡(jiǎn)單，大規(guī)模生產(chǎn)成本低廉 | 生產(chǎn)成本低廉，不產(chǎn)內(nèi)毒素，能夠分泌表達(dá)蛋白 |
缺點(diǎn) | 分泌能力差 | 產(chǎn)量相對(duì)較低 |
常用宿主 | Rosetta(DE3), Rosetta(DE3)pLysS, Rosetta 2(DE3)pLysS, Origami 2(DE3), Rosetta-gami 2(DE3)pLysS | WB600,WB800N, Bacillus Subtilis 168
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表達(dá)質(zhì)粒體系選擇
目前常用的重組蛋白表達(dá)質(zhì)粒載體融合了復(fù)制子(Replicon)、啟動(dòng)子(promoter)、篩選標(biāo)簽(selection marker)、多克隆位點(diǎn)（MCS）和融合蛋白移除策略(fusion tag removal strategy)，如圖所示：
艾普蒂生物的科學(xué)家通過(guò)改造pET載體，獲得雙表達(dá)質(zhì)粒（BiPlasmid vector），該質(zhì)粒含有雙MCS位點(diǎn)，雙T7啟動(dòng)子，雙lac操縱子和雙核糖體結(jié)合位點(diǎn)，利用該質(zhì)粒我們可以為客戶進(jìn)行一次轉(zhuǎn)染操作，而獲得兩種蛋白的獨(dú)立表達(dá)。同時(shí)我們構(gòu)建了含有低溫誘導(dǎo)蛋白表達(dá)元件的pCold系列載體，該載體能夠在16℃條件下經(jīng)過(guò)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)大分子量蛋白，如上清表達(dá)150kDa活性蛋白。
融合標(biāo)簽選擇
親和標(biāo)簽：蛋白重組表達(dá)過(guò)程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用：一方面是為了使蛋白純化過(guò)程變得更加容易；另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶。蛋白標(biāo)簽可分兩類：一類是短肽類標(biāo)簽；一類是長(zhǎng)肽以融合蛋白（fused partner）形式共表達(dá)。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來(lái)分析，艾普蒂生物總結(jié)了常用的一些蛋白標(biāo)簽性質(zhì)，如表1所示。
表1 蛋白標(biāo)簽主要特征 |
肽標(biāo)簽 | 殘基/MW (kDa) | 配體/基質(zhì) | 純化條件 |
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Poly-Arg | ~5/0.80 | 陽(yáng)離子交換樹脂 | NaCl線性洗脫(0–400 mM) |
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Poly-His | ~6/0.84 | Ni2+瓊脂柱 | 20–250 mM咪唑/低pH |
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FLAG | 8/1.01 | FLAG抗體親和瓊脂柱 | 2–5 mM EDTA |
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Strep-tag II | 8/1.06 | 鏈親和素 | 2–25 mM脫硫生物素 |
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c-myc | 11/1.20 | myc抗體親和瓊脂柱 | 低pH |
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S-tag | 15/1.75 | S蛋白瓊脂柱 | 3 M異硫氰酸; 0.2 M檸檬酸鉀, pH 2或3 M MgCl2 |
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融合伴侶蛋白 | ca.（計(jì)算分子量） |
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| 可溶性促進(jìn) |
Fh8 | 69/8.0 | Ca2+依賴性苯基瓊脂糖凝膠 | 10 mM EDTA | ND |
Trx | 109/11.7 | 4氨基氧化苯胂瓊脂凝膠柱 | 5–1000mM 2-巰基乙醇 | +++ |
SUMO | ca. 100/12.0 | 親和標(biāo)簽純化（His） |
| ++++ |
BRT17 (β roll tag) | 153/14.7 |
| 25–75 mM Ca2+溶液沉淀 | ND |
GST | 211/26.0 | 谷胱甘肽瓊脂柱 | 10–20 mM還原谷胱甘肽 | + |
HaloTag7 | ca. 300/34.0 | 氯烷烴配體瓊脂柱 | 帶標(biāo)簽掛柱蛋白酶裂解 | ND |
MBP | 396/ca. 42.5 | 交聯(lián)支鏈淀粉 | 10 mM麥芽糖 | +++ |
ELPs | 550/ca.47.0 |
| 高濃度NaCl (>1.5 M)或溫度轉(zhuǎn)變方式 | ND |
NusA | 495/54.8 | 親和標(biāo)簽純化（His） |
| ++
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蛋白重組表達(dá)策略組合
重組蛋白的表達(dá)往往不像理論那樣一帆風(fēng)順，在實(shí)際的表達(dá)過(guò)程中有可能產(chǎn)生各種各樣的問(wèn)題。在選擇一個(gè)蛋白表達(dá)策略困難的情況下，那么采用看似笨拙的方法，有可能會(huì)成為一種意想不到的“成功捷徑”，比如項(xiàng)目要求構(gòu)建表達(dá)兩種重組蛋白時(shí)，構(gòu)建6種不同的表達(dá)質(zhì)粒，意味著有36種不同的表達(dá)條件組合，通過(guò)高通量微量蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)一次性就可獲得蛋白表達(dá)條件組合，后續(xù)中式飛行試驗(yàn)和成本控制會(huì)變得相對(duì)容易。
蛋白原核重組表達(dá)服務(wù)具體流程
我們的服務(wù)優(yōu)勢(shì)
--密碼子優(yōu)化：包含稀有密碼子分析，蛋白親水性分析和跨膜結(jié)構(gòu)域的預(yù)測(cè)分析
--多種融合標(biāo)簽載體和宿主，以保證高可溶蛋白表達(dá)和高蛋白活性
--多種規(guī)模蛋白發(fā)酵模式：小規(guī)模（1L，10L和30L）、大規(guī)模（80L，130L，250L和500L發(fā)酵罐）
--短時(shí)間內(nèi)制備高純度毫克級(jí)，克級(jí)重組蛋白
--低內(nèi)毒素：LAL檢測(cè)法<0.1EU/ug
--完整的GMP文件支撐體系，保證您的產(chǎn)品所有材料、試劑和制備信息可追溯
更多技術(shù)服務(wù)：
高通量測(cè)序相關(guān)檢測(cè)服務(wù)
項(xiàng)目名稱服務(wù)
mRNA測(cè)序/轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序（illumina nova-seq）服務(wù)
mRNA測(cè)序/轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序（BGI)服務(wù)
lncRNA測(cè)序（動(dòng)物）-高階版服務(wù)
lncRNA測(cè)序（動(dòng)物）-普通版服務(wù)
miRNA測(cè)序服務(wù)
cirRNA測(cè)序（RNaseR酶消化）服務(wù)
全基因轉(zhuǎn)錄組高通量測(cè)序（（miRNA、mRNA、lncRNA））服務(wù)
16S rDNA高通量測(cè)序（含分析）服務(wù)
宏基因組學(xué)測(cè)序服務(wù)
微量細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（smart-seq）服務(wù)
10X單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)
代謝組和16sRNA的關(guān)聯(lián)分析服務(wù)
DNA甲基化芯片服務(wù)
lncRNA芯片檢測(cè)服務(wù)
mRNA表達(dá)譜芯片服務(wù)
ceRNA芯片服務(wù)
ATAC-seq（轉(zhuǎn)座酶可接近性核染色質(zhì)區(qū)域測(cè)序分析）服務(wù)
CHIP-seq服務(wù)
WGBS（全基因組甲基化測(cè)序）服務(wù)
簡(jiǎn)化甲基化測(cè)序（RRBS）服務(wù)
RNA m6A甲基化測(cè)序（MeRIP Seq）服務(wù)
代謝組學(xué)相關(guān)檢測(cè)服務(wù)
項(xiàng)目名稱服務(wù)
中藥非靶代謝組（LC-MS）服務(wù)
非靶代謝組（LC-MS）/液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用服務(wù)
非靶代謝組（GC-TOF-MS）/氣象色譜質(zhì)譜非靶標(biāo)服務(wù)
非靶脂質(zhì)組（LC-MS）服務(wù)
7種短鏈脂肪酸靶標(biāo)定量(SCFA)服務(wù)
22種氨基酸定性定量服務(wù)
23 種神經(jīng)遞質(zhì)定量服務(wù)
41種膽汁酸定量服務(wù)
51種脂肪酸定量服務(wù)
5種TMAO及類似物定量服務(wù)
26種有機(jī)酸服務(wù)
35個(gè)黃酮定量服務(wù)
服務(wù)
服務(wù)
服務(wù)
蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)
蛋白組TMT（不含宏蛋白質(zhì)組）服務(wù)
Laber free非標(biāo)（不含宏蛋白質(zhì)組）服務(wù)
關(guān)鍵字： 重組蛋白原核表達(dá);原核表達(dá);蛋白原核表達(dá)服務(wù);原核表達(dá)服務(wù);重組蛋白原核表達(dá)服務(wù);
湖北艾普蒂生物工程有限公司（簡(jiǎn)稱：艾普蒂）由在國(guó)內(nèi)科研試劑領(lǐng)域有著十幾年從業(yè)經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)和企業(yè)管理團(tuán)隊(duì)組建而成，專門從事以抗體、蛋白、細(xì)胞、化學(xué)品為核心的試劑產(chǎn)品研發(fā)與銷售。
我們長(zhǎng)期聚焦于生命科學(xué)、生物醫(yī)藥、醫(yī)療診斷、分析檢測(cè)等領(lǐng)域，專注于為生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)。提供生命科學(xué) 試劑、供應(yīng)鏈服務(wù)等，為更多的生命科學(xué)科研工作者提供 專業(yè)、全面、安全、快捷的產(chǎn)品和服務(wù)。產(chǎn)品覆蓋 基因、蛋白、細(xì)胞、組織、動(dòng)物等水平的各種研究。
致力于成長(zhǎng)為我國(guó)重要的生命科學(xué)試劑和成果轉(zhuǎn)化一體化的領(lǐng)導(dǎo)者、致力于成為中國(guó)大型的科研試劑產(chǎn)品供應(yīng)商之一。