堿性磷酸酶（AKP/ALP）活性測定試劑盒說明書
微量法100T/48S
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
堿性磷酸酶（AKP/ALP）活性測定試劑盒測定意義：
AKP/ALP是一種含鋅的糖蛋白酶，在堿性環(huán)境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。AKP/ALP廣泛分布于人體各臟器中，以肝臟為主。
測定原理：
在堿性環(huán)境中，AKP/ALP催化磷酸苯二鈉生成游離酚；酚與4-氨基安替比林和鐵氰化鉀反應(yīng)紅色亞醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通過測定510 nm吸光度增加速率，來計算AKP活性。
自備儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍(lán)綠色之前均可使用。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。
粗酶液提?。?/span>
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，4℃、8000g離心10min，取上清液待測。
2. 細(xì)菌或細(xì)胞：按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
3. 血液可直接測定，或者適當(dāng)稀釋后測定。
堿性磷酸酶（AKP/ALP）活性測定試劑盒測定步驟：
1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到510 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30 min。
3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A空白管。
4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，加入4μL標(biāo)準(zhǔn)品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
5. 對照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
6. 測定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；
加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
其中標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管，測定管和對照管每個樣均需做。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。
AKP/ALP活性計算：
1. 血液中AKP/ALP活力計算
活性單位定義：37℃中每毫升血液每分鐘催化產(chǎn)生1μmol酚定義為1個酶活單位。
AKP/ALP活力(μmol/min /mL)= [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)×V反總] ÷V樣÷T=6.8×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)
2. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞中AKP/ALP活性計算
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 μ mol酚定義為1個酶活單位。
AKP/ALP(μmol/min/mg prot)=[C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)×V反總]÷(Cpr×V樣)÷T=6.8×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管) ÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1 μ mol酚定義為1個酶活單位。
AKP/ALP(μmol/min/g 鮮重)=[C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=6.8×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管) ÷W
（3）按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計算
活性單位定義：37℃中每104個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1 μ mol酚定義為1個酶活單位。AKP/ALP (μmol/min/104 cell)= [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)×V反總]÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T= 6.8×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量
C標(biāo)準(zhǔn)品：2μmol/mL；V反總：反應(yīng)體系總體積（mL），205μL=0.205mL； Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測定，建議使用本公司生產(chǎn)的BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒；W ：樣品質(zhì)量；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積（mL），0.004mL；V樣總：提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間（min），15 min。
注意事項：
1.試劑二、試劑三和試劑四均需避光保存。
2.試劑四變藍(lán)綠色后不能再使用。
3.加入試劑四后必須立即混勻，否則顯色不完全。
關(guān)鍵字： 堿性磷酸酶（AKP/ALP）活性測定試劑;堿性磷酸酶（AKP/ALP）活性測定試劑;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實業(yè)”、“GTX” 品牌。通過公司各部門員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽”的精神，堅持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽為國內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
公司在重視產(chǎn)品質(zhì)量的同時，也建立了一套集技術(shù)支持，物流售后服務(wù)等多部門聯(lián)動服務(wù)體系，努力把我們方便、快捷、周到的服務(wù)提供給每一個客戶，雅吉生物的試劑盒，在國內(nèi)眾多重點實驗室廣泛使用，深受廣大科研人員好評，先后在權(quán)威雜志文章中被引用。
本公司鄭重承諾：質(zhì)量保證、供貨及時、服務(wù)周到。