甜菜堿（Betaine）含量試劑盒說明書
分光光度法50管/48樣
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
甜菜堿（Betaine）含量試劑盒測定意義：
甜菜堿是一種廣泛分布于動(dòng)植物及微生物體內(nèi)的季銨型水溶性生物堿，是生物體內(nèi)膽堿的氧化產(chǎn)物，可以增強(qiáng)免疫力、降血脂、抗氧化、抗腫瘤，并可作為甲基供體，參與促進(jìn)動(dòng)物蛋白質(zhì)和脂肪代謝、增進(jìn)食欲、緩和應(yīng)激、調(diào)節(jié)滲透壓、穩(wěn)定維生素等多種生物作用，在化工、醫(yī)藥、食品添加劑等領(lǐng)域有較廣泛的應(yīng)用。
測定原理：
甜菜堿在強(qiáng)酸條件下和雷氏鹽發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生沉淀，沉淀用丙酮溶解形成紅色溶液，在525nm處有特征吸收峰，測定525nm處的吸光值，可計(jì)算得樣品的甜菜堿含量。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、乙醚、鹽酸、丙酮和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體30mL×1瓶 ，4℃保存；
試劑一：粉劑3瓶4℃保存，臨用前根據(jù)用量配制，每瓶加40mL蒸餾水溶解，加780μL濃鹽酸調(diào)pH為1。
試劑二：99%乙醚，自備。取無水乙醚99mL，加入蒸餾水1mL，混勻。
試劑三：70%丙酮，自備。（易揮發(fā)，根據(jù)用量自備，丙酮：蒸餾水=7:3）。
甜菜堿提?。?/span>
取烘干后過40目篩的樣品約0.04g，加1.6mL水，置于60℃提取30min，期間不斷震蕩。再加入400μL提取液，混勻后10000g，25℃，離心10min，取上清液。
甜菜堿（Betaine）含量試劑盒測定操作表：
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長至525nm。
2、操作表
| 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測定管 |
上清液（μL） |
| 1200 |
蒸餾水（μL） | 1200 |
|
試劑一（μL） | 2000 | 2000 |
充分混勻，4℃中反應(yīng)2h，12000rpm，25℃，離心10min，棄上清 |
試劑二（μL） | 2000 | 2000 |
混勻，12000rpm，25℃，離心10min，棄上清。置于通風(fēng)櫥使殘余乙醚自然揮發(fā)干凈 |
試劑三（μL） | 1200 | 1200 |
震蕩使沉淀充分溶解，取1mL于1mL玻璃比色皿，試劑三調(diào)零，記錄標(biāo)準(zhǔn)管和測定管525nm處吸光值A測定與A空白。ΔA=A測定管-A空白管。 |
甜菜堿含量計(jì)算公式：
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 1.004x + 0.0057，R2 = 0.9993；x為甜菜堿濃度（mg/mL），y為吸光值。
甜菜堿含量（mg/g 干重）=（ΔA-0.0057）÷1.004× V標(biāo)準(zhǔn)÷(V樣÷V樣總×W)
=1.99×（ΔA-0.0057）÷W
V標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品體積，1.2mL；V樣：反應(yīng)中樣本體積，1.2mL；V樣總：加入提取液體積，2mL；W：樣本質(zhì)量，g
注意事項(xiàng)：
1、 試劑一配制時(shí)pH嚴(yán)格控制為1，否則會(huì)導(dǎo)致反應(yīng)不完全，配制后4℃只能穩(wěn)定幾個(gè)小時(shí)，配制后盡快使用。
2、 試劑二與試劑三對(duì)呼吸道有一定的刺激，請(qǐng)做好防護(hù)工作。
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本公司鄭重承諾：質(zhì)量保證、供貨及時(shí)、服務(wù)周到。