組織無機磷含量測定試劑盒說明書
分光光度法 50管/48樣
注 意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
組織無機磷含量測定試劑盒測定意義:
無機磷主要指磷酸根,參與生物體內(nèi)多種代謝,包括能量代謝、核酸代謝、蛋白質磷酸化和脫磷酸化等等,此外促進碳水化合物的合成、轉化和轉運。
測定原理:
鉬藍與磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物質,通過測定660nm光吸收可計算無機磷含量。
自備儀器和用品:
可見分光光度計、離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配置:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前配制,加入20 mL蒸餾水,充分溶解后加入試劑二(全部),混勻。
標準品:液體×1支, 4℃保存。
無機磷提?。?/span>
按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。10000rpm,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定:
1. 分光光度計預熱30 min,調(diào)節(jié)波長到660 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 打開水浴鍋,調(diào)節(jié)溫度到40℃。
3. 空白管:取EP管,依次加入500μL蒸餾水,500μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度,記為A空白管。
4. 標準管:取EP管,依次加入50μL標準液,450μL蒸餾水,500μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度,記為A標準管。
5. 測定管:取EP管,依次加入50μL上清液,450μL蒸餾水,500μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度,記為A測定管。
注意:空白管和標準管只需測定一次。
組織無機磷含量測定試劑盒組織無機磷含量計算公式:
(1) 按照蛋白含量計算
無機磷含量(μmol/mg prot)= [C標準液×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)]×V總÷Cpr
=1×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷Cpr
(2) 按照樣本質量計算
無機磷含量(μmol/g )= [C標準液×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)]×V總÷W
=1×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷W
C標準液:1mmol/L;V總:上清液總體積,1mL=0.001 L;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣品質量,g。
注意事項:
1. 試劑三需臨用前配制,并且當天使用完畢。
2. 40min內(nèi)完成比色。
3. 最低檢出限為10μmol/L。
關鍵字: 組織無機磷含量測定試劑盒;組織無機磷含量測定試劑盒;
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