細胞集落形成實驗是檢測培養(yǎng)細胞增殖能力的有效方法之一，通過計算集落形成率(colony forming efficiency)，來測定測試細胞的增殖能力。

6孔板、吸管、槍頭、血球計數(shù)板、基質(zhì)膠等放入超凈工作臺消毒30min。

①取出貼壁率>90%的細胞（處于對數(shù)生長期），消化離心，重懸細胞并進行細胞計數(shù)。

②6孔板種板：實驗分組，每個孔中加入1000個細胞，放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

③培養(yǎng)1周后，當肉眼可見集落形成時，取出6孔板，棄除培養(yǎng)液，每孔加入2mL甲醇固定30min，棄除甲醇，每孔加入2mL0.1%結(jié)晶紫染色3min，然后清洗掉結(jié)晶紫，數(shù)碼相機拍照，光鏡下計數(shù)集落

1．收集對數(shù)生長期的細胞進行活細胞計數(shù)，然后調(diào)整細胞濃度，用含20%FBS的DMEM制成1000活細胞／ml的細胞懸液。 

2．用蒸餾水制備1.2%、0.7%兩個濃度的低熔點瓊脂糖，高壓滅菌后，維持在40℃不會凝固； 

3．1.2%瓊脂糖和2xDMEM等體積混合，6孔板中加入1.4ml，RT凝固作為底層瓊脂，置CO2溫箱中備用； 

4．0.7%瓊脂糖和2xDMEM等體積混合，再加入細胞懸液充分混勻，RT凝固作為上層瓊脂，勿有氣泡，將實驗組和對照組分兩組加好，蓋上蓋并作好標記。在室溫放置20分鐘使細胞瓊脂懸液凝固。  

5．然后移培養(yǎng)板或平皿于CO2培養(yǎng)箱中37℃進行培養(yǎng)。 

6．培養(yǎng)7～l0天，肉眼觀察并計數(shù)細胞集落。 

以肉眼可見的細胞團作為計數(shù)集落的標準。集落的計數(shù)和計算：集落數(shù)=n孔中細胞集落數(shù)總和/n孔，集落形成率=集落數(shù)/接種培養(yǎng)細胞總數(shù)×100％