雙螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒
一、產(chǎn)品簡介。
本產(chǎn)品由螢火蟲螢光素酶檢測試劑和海腎螢光素酶檢測試劑組成，在同一體系中依次測定兩種螢光素酶的活性，從而實(shí)現(xiàn)雙螢光素酶報(bào)告基因的檢測。檢測目的基因轉(zhuǎn)錄水平變化時(shí)可以將目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或 5’端的啟動(dòng)子區(qū)域的 DNA 序列克隆到螢火蟲螢光素酶基因的上游（5’端），也可以把目的基因的 3’-UTR 區(qū)域的 DNA 序列添加
到螢火蟲螢光素酶基因的下游，構(gòu)建報(bào)告基因質(zhì)粒，與表達(dá)海腎螢光素酶的質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染細(xì)胞，表達(dá)螢火蟲螢光素酶和海腎螢光素酶。螢火蟲螢光素酶的表達(dá)水平通常反應(yīng)目的基因在特定條件下的轉(zhuǎn)錄調(diào)控變化，而海腎螢光素酶的表達(dá)水平一般用作體系內(nèi)參，來消除細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞數(shù)量等因素的影響。
二、運(yùn)輸與存儲(chǔ)條件。
本產(chǎn)品低溫運(yùn)輸，依據(jù)各組份保存條件分開保存，有效期 12 月。
三、特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)。
1. 本試劑靈敏度高于市售同類試劑，可以更有效的檢測報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄水平變化。
2. 本試劑盒操作簡單，能夠快速完成雙螢光素酶報(bào)告基因檢測。
四、使用說明。
1. 以 6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞為處理對(duì)象，實(shí)驗(yàn)步驟如下：
2. 細(xì)胞轉(zhuǎn)染。細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)請(qǐng)參考本公司轉(zhuǎn)染試劑（Omifection，Cat：Omc-01）說明書中的實(shí)驗(yàn)步驟，將編碼螢火蟲螢光素酶基因的質(zhì)粒與編碼海腎螢光素酶基因的質(zhì)粒按照 10:1（或 5:1）的比例混合，轉(zhuǎn)入 6 孔板的細(xì)胞中，2 μg/孔。
3. 細(xì)胞裂解液配制。將 5×細(xì)胞裂解液與 ddH2O 按照 1:4 的比例混合，配制成 1×細(xì)胞裂解液?，F(xiàn)
用現(xiàn)配，剩余的細(xì)胞裂解液可在 4℃保存一周。
4. 細(xì)胞裂解。轉(zhuǎn)染 48 h，棄培養(yǎng)液，預(yù)冷的 PBS 洗滌細(xì)胞 1 次，加入 1 ml 細(xì)胞裂解液（1×），置于 4 ℃的搖床上，輕輕旋轉(zhuǎn) 15-30 min，裂解細(xì)胞。裂解液轉(zhuǎn)入 1.5 ml EP 管中，12,000×g，4 ℃離心 5 min，棄沉淀，上清轉(zhuǎn)移至新的 EP 管中，作為待測樣品。
5. 海腎螢光素酶檢測試劑配制。每個(gè)樣品需要 100 μl 海腎螢光素酶檢測試劑。根據(jù)樣品數(shù)量，按照海腎螢光素酶底物:SFAR 稀釋液=1:50 的比例配制海腎螢光素酶檢測試劑。
6. 活性測定。打開檢測儀器，設(shè)置測定參數(shù)，一般延遲時(shí)間（整合時(shí)間）為 2 sec，測定時(shí)間為 10-20 sec。吸取 100 μl 螢火蟲螢光素酶檢測試劑，加入 EP 管（或 96 孔板）中，再加入 5-20 μl 待測樣品（細(xì)胞裂解液），混勻，測定螢火蟲螢光素酶活性值。同一檢測體系中再加入 100μl 海腎螢光素酶檢測試劑，混勻，測定海腎螢光素酶活性值。
7. 整理并分析螢火蟲螢光素酶活性值與海腎螢光素酶活性值的比例，鑒定目的基因表達(dá)變化。
五、注意事項(xiàng)
1. 酶促反應(yīng)受溫度影響，待測樣品和試劑應(yīng)達(dá)到室溫后再進(jìn)行檢測。
2. 螢火蟲螢光素酶檢測試劑不可反復(fù)凍融，可分裝成100 μl/管，置于-80℃長期保存。
3. 手動(dòng)測定時(shí)，樣品加入底物時(shí)的間隔時(shí)間和混合次數(shù)盡量一致，減少操作誤差。
4. 海腎螢光素酶的底物腔腸素是乙醇溶液，易揮發(fā)。收到產(chǎn)品時(shí)若發(fā)現(xiàn)其體積小于0.2 ml，可自行添加適當(dāng)?shù)臒o水乙醇補(bǔ)齊體積為0.2 ml。
注意：
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。
關(guān)鍵字： 雙螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒 ;螢火蟲螢光素酶;海腎螢光素酶;
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