核酸外切酶一種要求有一個(gè)游離末端才能降解DNA或RNA的酶。5′-核酸外切酶需要有一個(gè)游離的5′端，從5′→3′的方向逐個(gè)降解核酸分子；3′-核酸外切酶則需要一個(gè)3′游離端，并按相反方向逐個(gè)降解核酸分子；而外切核酸酶Ⅲ(ExoⅢ)則是大腸埃希氏菌(Escherichiacoli)的一個(gè)多功能酶，使用最多的酶活性是3′→5′-核酸外切酶的活性，可在dsDNA中造成一個(gè)ssDNA區(qū)，故可用于Sanger的DNA序列分析法中。