背景^[1-3]

HTERT RPE-1細(xì)胞系|人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞是一種在實(shí)驗(yàn)室中用于研究的細(xì)胞系，主要來源于人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞。

HTERT(Human Telomerase Reverse Transcriptase，人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶)是一種在細(xì)胞分裂過程中起重要作用的酶，它的主要功能是幫助維持染色體的穩(wěn)定性，防止染色體的縮短和端粒的消失。在正常細(xì)胞中，隨著細(xì)胞分裂次數(shù)的增加，端粒會(huì)逐漸縮短，當(dāng)端?？s短到一定程度時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂。而在某些類型的癌癥細(xì)胞中，HTERT被過度表達(dá)，使得細(xì)胞能夠逃避這種生長限制，繼續(xù)無限制地分裂。

HTERT RPE-1細(xì)胞系|人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞是一種來源于人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的細(xì)胞系，這種細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)室中常用于研究視網(wǎng)膜疾病、眼部腫瘤等。

HTERT RPE-1細(xì)胞系|人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞

HTERT RPE-1細(xì)胞系|人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

1）復(fù)蘇HTERT RPE-1細(xì)胞系|人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）HTERT RPE-1細(xì)胞系|人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

3）HTERT RPE-1細(xì)胞系|人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。棄培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，進(jìn)行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入到凍存液中。

應(yīng)用^[4-5]

HTERT RPE-1細(xì)胞系|人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞可以用于谷胱甘肽在微波輻射致hTERT-RPE1細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄中的作用

對(duì)HTERT RPE-1細(xì)胞系|人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞細(xì)胞和添加5 0μmol·L-1谷胱甘肽(GSH)培養(yǎng)2 4h后的hTERT RPE1細(xì)胞進(jìn)行2 4 5 0MHz,1 0mW·cm-2的微波輻射,并就有關(guān)細(xì)胞應(yīng)激和凋亡基因的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行比較研究。

方法:應(yīng)用基因芯片技術(shù)對(duì)微波輻射hTERT RPE1細(xì)胞和添加GSH(5 0μmol·L-1,2 4h)的HTERT RPE-1細(xì)胞系|人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的mRNA進(jìn)行檢測.結(jié)果:在97條有關(guān)應(yīng)激和凋亡的目的基因中發(fā)現(xiàn):與未添加GSH的HTERT RPE-1細(xì)胞系|人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞細(xì)胞相比,添加GSH的細(xì)胞有1 1條基因轉(zhuǎn)錄下調(diào),其中與應(yīng)激相關(guān)的基因M 31 1 6 6表現(xiàn)出明顯下調(diào)(1 1倍),與細(xì)胞增殖相關(guān)的基因AB0 1 4 5 0 9,AF 0 5 36 4 1,NM 0 1 2 1 77,AF 0 0 1 4 97和AF 1 1 7386轉(zhuǎn)錄下調(diào),與細(xì)胞蛋白質(zhì)翻譯、折疊和加工有關(guān)的基因NM 0 0 1 4 1 8,AJ2 5 0 91 5及U36 336轉(zhuǎn)錄下調(diào),與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)代謝有關(guān)的基因U32 5 1 9,AF 1 1 7386等轉(zhuǎn)錄下調(diào);只有基因W5 2 72 1轉(zhuǎn)錄上調(diào)。

結(jié)論:GSH(5 0μmol·L-1,2 4h)可顯著降低HTERT RPE-1細(xì)胞系|人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞急性期反應(yīng)蛋白轉(zhuǎn)錄,使細(xì)胞蛋白質(zhì)合成、翻譯和細(xì)胞生長增殖等基因轉(zhuǎn)錄下調(diào),并同時(shí)使調(diào)節(jié)信號(hào)通道和周期蛋白豐度的相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄下調(diào)。

參考文獻(xiàn)

[1] Genetic evidence for interactions between yeast importinα(Srp1p)and its nuclear export receptor,Cse1p.A.J.Schroeder;;X.-H.Chen;;Z.Xiao;;M.Fitzgerald-Hayes.MGG-Molecular and General Genetics,1999

[2] Telomerase as an emerging target to fight cancer—Opportunities and challenges for nanomedicine.C.Philippi;;B.Loretz;;U.F.Schaefer;;C.M.Lehr.Journal of Controlled Release,2010

[3] Telomerase Maintains Telomere Structure in Normal Human Cells.Kenkichi Masutomi;;Evan Y.Yu;;Shilagardy Khurts;;Ittai Ben-Porath;;Jennifer L.Currier;;Geoffrey B.Metz;;Mary W.Brooks;;Shuichi Kaneko;;Seishi Murakami;;James A.DeCaprio;;Robert A.Weinberg;;Sheila A.Stewart;;William C.Hahn.Cell,2003

[4] Demethylation of the human telomerase catalytic subunit(hTERT)gene promoter reduced hTERT expression and telomerase activity and shortened telomeres.Isabelle Guilleret;;Jean Benhattar.Experimental Cell Research,2003

[5]劉秀紅,申洪,史永亮等.谷胱甘肽在微波輻射致hTERT-RPE1細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄中的作用[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2003(15):1345-1348.